【GB 13105—1991】
 
中华人民共和国卫生部1991-06-07批准 1992-03-01实施

    1　主题内容与适用范围
　　本标准规定了食品中硒最大允许限量标准。
　　本标准适用于粮食、豆类及制品、蔬菜、水果、肉类(畜、禽)、肾、鱼类、蛋类、乳类等食品。
　　2　食品中硒限量卫生指标
　　食品中硒限量卫生指标见下表

    3　测定方法
　　3.1　原理
　　将样品用混合酸消化，使硒化合物氧化为无机Se⁴，在酸性条件下Se⁴与2，3－二氨基萘(2，3－Di－aminoaphthalene，缩写为DAN)反应生成4，5－苯并苤硒脑(4，5－Benzo piaselenol)，然后用环已烷萃取。在激发光波长为376nm，发射光波长为520nm条件下测定荧光强度，从而计算出样品中硒的含量。
　　3.2　试剂
　　试剂规格需用分析纯或优级纯。水均需用去离子水，其比电阻在30×10⁴Ω以上。
　　3.2.1　硒标准溶液
　　精确称取元素硒100.0mg，溶于少量浓硝酸中，加入2mL过氯酸(70％～72％)，置沸水浴中加热3～4h，冷却后加入8.4mL盐酸(盐酸浓度为0.1mol/L)。再置沸水浴中煮2min。准确稀释至1000mL，此为储备液(Se含量：100μg/mL)。应用时用0.1mol/L盐酸将储备液稀释至每毫升含0.5μg硒。置于冰箱内保存。
　　3.2.2　0.1％DAN试剂
　　此试剂在暗室内配制。称取DAN 200mg于一带盖三角瓶中，加入0.1mol/L盐酸200mL，振摇约15min使其全部溶解。加入约40mL环已烷，继续振荡5min。将此液倒入塞有玻璃棉(或脱脂棉)的分液漏斗中，待分层后滤去环已烷层，收集DAN溶液层，反复用环已烷纯化直至环己烷中荧光降至最低时为止(约纯化5～6次)。将纯化后的DAN溶液储于棕色瓶中，加入约1cm厚的环已烷覆盖表层，置冰箱内保存。必要时在使用前再以环己烷纯化一次。
　　3.2.3　混合酸液
　　将亚硝酸及高氯酸(70％～72％)按2∶1体积混合。
　　3.2.4　去硒硫酸
　　取浓硫酸200mL加于200mL去离子水中，再加入48％氢溴酸30mL，混匀，置沙浴上加热至出现白浓烟，此时体积应为200mL。
　　3.2.5　EDTA混合液
　　a.　0.2mol/LEDTA二钠盐：称取37gEDTA二钠盐加热至完全溶解于水中，冷却后稀释至500mL；
　　b.　10％盐酸羟胺溶液：称取10％盐酸羟胺溶于水中，稀释至100mL；
　　c.　0.02％甲酚红指示剂：称取甲酚红50mg溶于少量水中，加稀释氨水(1∶1)1滴，俟完全溶解后加水稀释至250mL。
　　将上述a及b液各取50mL，加c液5mL，加水稀释至1L，混匀。
　　3.2.6　稀释氨水〔氨水∶水＝1∶1(V/V)〕。
　　3.2.7　浓盐酸(比重1.2)。
　　3.2.8　环已烷
　　市售品需先测试有无荧光杂质，必要时重蒸后使用，用过的环己烷可回收，重蒸后再使用。
　　3.2.9　10％盐酸溶液
　　10mL浓盐酸加90mL水。
　　3.3　仪器
　　主要仪器为荧光分光光度计。
　　3.4　试样
　　3.4.1　粮食
　　样品用水快速洗三次，置60℃烤箱中烤20～30min，俟表面水分除去后，以不锈钢磨磨成粉状，储于塑料瓶中，放一小包樟脑精，盖紧瓶塞保存，备用。
　　3.4.2　蔬菜和其他动物性食物
　　取可食部，用蒸馏水冲洗三次后，用纱布吸去水滴，用不锈钢刀切碎，取一定量样品在鼓风烤箱中于60C烤干，称重，计算水分。磨成粉保存，备用。
　　计算时应折合成鲜样重。
　　3.5　分析步骤
　　3.5.1　样品的消化
　　称含硒量约为0.01～0.5μg的粮食或蔬菜及动物性样品0.5～2.0g于磨口三角瓶内，加10mL5％去硒硫酸，俟样品湿润后再加20mL混合酸液放置过夜，次日置沙浴上逐渐加热。当剧烈反应发生后，溶液呈无色，继续加热至白烟产生，此时溶液逐渐变成淡黄色，即达终点。某些蔬菜样品消化后出现混浊，以致难以确定终点，这时可注意瓶内出现滚滚白烟，此刻立即取下，溶液冷却后又变为无色。有些含硒较高的蔬菜含有较多的Se⁶，需要在消化完成后再加10mL10％盐酸，继续加热，使再回终点，以完全还原Se⁶为Se⁴，否则结果将偏低。
　　3.5.2　4，5－苯并苤硒脑的生成与测定
　　3.5.2.1　上述消化后的溶液加入20mLEDTA混合液，用氨水(1∶1)及盐酸调至淡粉红橙色(pH1.5～2.0)。
　　3.5.2.2　以下步骤在暗室中操作
　　加入DAN试剂3mL，混匀后，置沸水浴中加热5min，取出冷却后，加环已烷3.0mL，振摇4min，将全部液体移入分液漏斗，俟分层后放掉水层，小心将环己烷层由分液漏斗上口倾入带盖试管中，勿使环己烷中混有水滴，于荧光分光光度计上用激发光波长376nm、发射光波长520nm测定苤硒脑的荧光强度。
　　3.5.3　硒标准曲线绘制
　　精确量取标准硒溶液(0.05μg/mL)0.0，0.2，1.0，2.0及4.0mL(相当0.00，0.01，0.05，0.10及0.20μgSe)，加入去离子水5mL后，按样品测定步骤同时进行测定。
　　已知当硒含量在0.5μg以下时荧光强度与硒含量呈线性关系，所以在大量测定样品时，每次只需作试剂空白与样品硒含量相近似的标准管(双份)即可。
　　3.6　分析结果的计算
      S       F₂-F₀
x=---------╳------
    F₁-F₀       m
式中：X——样品中硒含量，μg/g；
　　S——标准硒含量，μg；
　　F₁——标准硒荧光读数；
　　F₂——样品荧光读数；
　　F₀——空白管荧光读数；
　　m——样品质量，g。
　　3.7　精密度
　　变异系数：小于10％。
　　3.8　检出限：3ng。
　　附加说明：
　　本标准由卫生部卫生监督司提出。
　　本标准由中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所负责起草。
　　本标准主要起草人王淮洲、杨光圻、韩驰。
　　本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。